不朽情缘MG在生物医药领域，RNA模板的制备是至关重要的一步。我们常用的RNA提取方法主要包括传统的酚-氯仿抽提法和柱式抽提法。以下是这两种方法的操作流程概要。

一、RNA模板的制备

1. 酚-氯仿抽提法

以不朽情缘MG的RNA提取产品Vazyme RNAisolater Total RNA Extraction Reagent (Vazyme#R401)为例，制备所需材料包括氯仿、异丙醇、75%乙醇（用DEPC水配置）和DEPC水。

样本制备步骤

注意：样本量过大会导致裂解不充分，降低产物纯度。1 ml的RNAisolater能够完全裂解的样本量如下：

对于贴壁细胞：首先弃去培养液，PBS洗涤一次；每10 cm²的培养面积加入1-3 ml的RNAisolater，确保其覆盖细胞表面，然后使用移液器轻轻吹打细胞。将裂解液转移至15 ml离心管中，反复吹打至无明显颗粒，冰上静置5分钟。

对于悬浮细胞：收集细胞后PBS洗涤一次，随后每5×10⁶-10⁷个细胞加入1 ml的RNAisolater，使用移液器轻轻吹打，冰上静置5分钟以确保完全裂解。

对于动物组织：将液氮研磨的组织立即转移至离心管中，加入RNAisolater，静置待融化后继续吹打至裂解液透明。最后将裂解液转移至离心管中，12,000×g、4℃离心5分钟，吸取上清。

2. 柱式抽提法

以不朽情缘MG的FastPureTM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit（Vazyme#RC101/RC111）为例，所需材料包括β-巯基乙醇、无水乙醇及RNase-free枪头等。

细胞处理步骤

对于贴壁细胞：无需消化，可以直接使用Buffer RL1（已加入β-巯基乙醇）进行裂解；若使用胰酶消化后，离心收集细胞，再加入500 μl的Buffer RL1（每2-5×10⁶个细胞）。反复吹打直至看不到细胞团块。注意，使用前需在Buffer RL1中加入β-巯基乙醇至终浓度为1%。

对于悬浮细胞：直接离心收集后加入500 μl的Buffer RL1，反复吹打混匀至无细胞团块。如不立即进行后续步骤，可以将样本保存至-70℃。

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