在不朽情缘MG的miRNA研究中，常常需要验证miRNA与基因靶向关系。miRNA通过其种子序列（5'端第2-8个碱基）靶向结合mRNA的3'UTR区域，诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解，或抑制mRNA的翻译过程。基于这一原理，通过将目标基因的3'UTR区域（或结合位点下游500bp）插入到荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，与miRNA mimics共同转染目的细胞，加入底物后，可以检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性降低，则说明miRNA与靶基因的3'UTR存在相互作用。

双荧光素酶报告基因检测的工作原理主要基于以下几个步骤：首先，利用生物信息学分析软件（如TargetScan、StarBase和miRanda等）预测miRNA靶基因的3'UTR区域是否含有miRNA结合位点。将预测能够与miRNA结合的3'UTR序列插入载体中，即萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）的3'UTR。当miRNA与载体中插入的序列结合后，miRNA将通过抑制萤火虫荧光素酶的翻译，导致荧光值降低。通过这样的结构验证步骤，我们能够有效地确认miRNA与靶基因3'UTR之间的相互作用，这为研究miRNA的功能和调控网络提供了重要工具。

不朽情缘MG的双荧光素酶报告基因检测服务流程如下：首先，准备HEK293细胞或特定目标细胞。选择适合的转染试剂，如HieffTrans®invitrosiRNA/miRNA转染试剂，以及报告基因检测试剂盒：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit。同时，需准备相关的仪器和耗材，如酶标仪和细胞培养板。

实验步骤为：确认目标细胞的质粒瞬转效率，确保效率在40%以上，方可进行实验。首先，将状态良好、处于对数生长期的细胞消化后，接种于24孔培养板中，培养过夜，待细胞覆盖率约70%时进行转染。转染前更换新鲜的培养基，并按照说明书配置转染试剂。转染48小时后收集细胞样品，并保存于-80℃冰箱中。

接下来，根据报告基因检测试剂盒的说明进行检测：将充分裂解后的样品离心，然后进行荧光素酶检测。按照仪器说明设定参数，使用一致的样品体积进行测量，并设置空白对照孔。常规检测分组包括不同的mimics和质粒组合，以便观察其对荧光素酶活性的影响。

通过这一系列实验步骤，不朽情缘MG能够加速基础研究与药物筛选进程，为科研人员提供可靠的服务及支持。

相关产品清单：
- 双荧光素酶报告基因检测试剂盒：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（货号：11402ES），规格：60/80/100T/1000T
- 转染试剂：HieffTrans®Liposomal Transfection Reagent（货号：40802ES），规格：01/03 100μL/1mL
- HieffTrans®invitrosiRNA/miRNA转染试剂（货号：40806ES），规格：01/02/03 1mL/0.5mL/1mL