### 人B淋巴母细胞HMy2CIR培养说明书

#### 一、细胞培养条件

本细胞系的培养条件需维持在37℃、5% CO2的环境中，以确保细胞的正常生长与增殖。

#### 二、细胞收到后处理

收到细胞样品后，首先使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，随后放置在超净台内进行无菌操作。待细胞稳定后，建议用完全培养液灌满瓶子并封好瓶口，以确保运输过程的安全与有效。每次观察细胞状态时，应在显微镜下拍摄不同倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为后续服务的重要依据，若未提供照片则默认收到的细胞状态良好。在传代时，建议将一瓶细胞用原瓶的完全培养基处理，另瓶使用自配的完全培养基，以便做对比培养。

#### 三、细胞培养步骤

##### a、细胞传代：

当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，再放入37℃、5% CO2的培养箱。若细胞密度超80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞状态，当大部分细胞变圆并脱落时，迅速轻拍培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml的完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

##### b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液并用PBS冲洗一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后，加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞加入1ml的不含血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如后期计划转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

##### c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项：

在运输过程中，若细胞贴壁不牢，易出现脱落现象，这属于正常情况。如有较多细胞脱落，可将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清以用于后续的对比培养。处理沉淀细胞时，加入1-2ml的胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应，重复离心操作，最后按1:2比例分瓶传代并补充新培养基。

#### 五、售后条款：

1）细胞出现问题的重发条件与标准：

1. 运输过程中发生各类问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等）可申请重发。
2. 如细胞收到后48小时内发现污染问题，需提供实验结果以便验证重发。
3. 常温发货的细胞静置24小时后或干冰发货的细胞复苏后24小时内，如细胞存活率低（需附真实细胞状态照片），可申请重发。
4. 如干冰发货细胞复苏后24小时内，或常温发货细胞静置4小时后发现未开封的污染，可申请重发。
5. 若7天内发现活性下降问题，需通过台盼蓝染色法验证细胞活力，并提供数据以申请重发。
6. 收货当天以及第2、3天需拍照记录，如3天未告知则视为产品合格。若4-7天内出现问题，并提供相应照片及操作步骤，技术人员将在责任归属方面进行判定。

2）细胞问题不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染，不予重发；
2. 错误操作导致的细胞状态变差，不予重发；
3. 使用非推荐培养体系导致的细胞状态问题，不予重发；
4. 若未提供细胞培养前3天的照片，细胞状态不佳的情况将不予重发；
5. 若细胞在培养过程中进行了其它处理，将不予重发；
6. 若在收到后2天内未及时告知问题，不予重发；
7. 其他情况将视具体情况而定。

总之，保持严格的操作规范以及良好的记录是确保细胞培养成功的关键。我们推荐使用不朽情缘MG的细胞培养产品，以确保最佳的细胞生长和研究效果。